磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法

磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法本文简介：磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法科研实验2010-04-2022:25:48阅读935评论0字号：大中小订阅0.01MPBSPBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4，pH7.2)PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl137mmol/L，KCl

磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法本文内容：

磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

科研实验

2010-04-20

22:25:48

阅读935

评论0

字号：大中小

订阅

0.01M

PBS

PBS

(135

mM

NaCl,2.7

mM

KCl,1.5

mM

KH2PO4,and

8

mM

K2HPO4，pH

7.2)

PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl

137mmol/L，KCl

2.7mmol/L，Na2HPO4

4.3mmol/L，

KH2PO4

1.4mmol/L

称7.9g

NaCl，0.2g

KCl，0.24g

KH2PO4(or

1.44g

Na2HPO4)和1.8g

K2HPO4，溶于800

ml

蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1

L。保存于4℃冰箱中即可。

需要注意的是，通常所说的浓度0.01

M

指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na

离子或K

离子的浓度，Na

离子和K

离子只是用来调节渗透压的。

母液的配制：

0.2M

Na2HPO4：称取

71.6g

Na2HPO4-12H2O，溶于

1000ml

水

0.2M

NaH2PO4：称取

31.2g

NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml

水

各种浓度PB(pH=7.4)的配制：

先配

0.2M

PB

(pH=7.4，100ml)：取19ml

0.2mol/L的

NaH2PO4，

81ml

0.2mol/L

的

Na2HPO4,即可。

然后

只需将0.2M

PB

(pH=7.4)按相应比例适当稀释

即可，如：

0.1M

PB（PH=7.4）

：取

500ml

0.2M

PB，加水稀释至

1000ml

即可。

0.01M

PB

（PH=7.4）：取50ml

0.2M

PB，加水稀释至

1000ml

即可。

0.02M

PB

（PH=7.4）：取100ml

0.2

M

PB，加水稀释至

1000ml

即可。

若需要

NaCl的话，加入

NaCl

至0.9%（g/100ml）即可。

另：其它各种另

PH值的

0.2M

PB（100ml)配方

：

pH

0.2M

NaH2PO4（ml）

0.2M

Na2HPO4（ml）

5.7

93.5

6.5

5.8

92

8

5.9

90

10

6.0

87.7

12.3

6.1

85

15

6.2

81.5

18.5

6.3

77.5

22.5

6.4

73.5

26.5

6.5

68.5

31.5

6.6

62.5

37.5

6.7

56.5

43.5

6.8

51

49

6.9

45

55

7.0

38

62

7.1

33

67

7.2

28

72

7.3

23

77

7.4

19ml

81ml

7.5

16

84

7.6

13

87

7.7

10.5

90.5

7.8

8.5

91.5

7.9

7

93

8.0

5.3

94.7

0.01M

磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

称取8g

NaCl、0.2g

KCl、1.44g

Na2HPO4和0.24g

KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中。

需要注意的是，通常所说的浓度0.01M

指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na

离子或K

离子的浓度，Na

离子和K

离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100

u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。

PH

7.6

7.4

7.2

7.0

H2O

1000

1000

1000

1000

NaCl

8.5

8.5

8.5

8.5

Na2HPO4

2.2

2.2

2.2

2.2

NaH2PO4

0.1

0.2

0.3

0.4

根据经验来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的影响下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在经过昼夜的时间后，PH值会明显改变（我亲自测过偏酸）。所以做实验的同学可要注意了，PH值可能会影响实验结果，甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气，要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS，如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液。

PBS缓冲液

称取NaCl

8g，KCl

0.2g，Na2HPO4?12H2O

3.63g,KH2PO4

0.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。

PBST缓冲液

取300μl

Tween-20

加入PBS

100ml中，混匀后即刻使用。现用现配。

如果是把所有固体加大十倍，配置为浓缩液，工作时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时，PH在6.5左右，明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调，但是有更方便的方法。

十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试，配好之后再测一次~

PH8.0的PBS配方详细

1.

NaCl

137mmol/L，KCl

2.7mmol/L，Na2HPO4

4.3mmol/L，

KH2PO4

1.4mmol/L

2.

向烧杯中加入约800

ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.

滴加浓盐酸将pH值调节至8.0，然后加入去离子水将溶液定容至1

L。

4.

高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS

Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1

mM

CaCl2和0.5

mM

MgCl2。

0.05mol/L

PBS(磷酸缓冲液Phosphate

Buffer

Solution，PBS)的配制：

甲液：0.05mol/L

Na2HPO4溶液

：称取磷酸氢二钠9.465g

7.099g,加蒸

馏水至1000ml

;

乙液：0.05mol/L

KH2P04溶液:

称取磷酸二氢钾,9.07g

6.803g,加蒸馏水至1000m1。

将甲乙液分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:

pH

甲液ml

乙液mI

5.29

2.5

97.5

5.59

5.0

95.0

5.91

10.0

90.0

6.24

20.0

80.0

6.47

30.0

70.0

6.***

40.0

60.0

6.81

50.0

50.0

6.98

60.0

40.0

7.17

70.0

30.0

7.38

80.0

20.0

7.73

90.0

10.0

8.04

95.0

5.0

你要配制pH=6.8的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。

有不少人认为常规漂洗用0.01M

PBS，配试剂用0.1M

PBS，但也有很多人不分浓度也没有出现问题；